Zawartość
Elektroforeza w żelu agarozowym jest procedurą naukową stosowaną w projektach badawczych i diagnostycznych obejmujących badania kwasów nukleinowych. Umożliwia naukowcom lub technikom oddzielenie naładowanych cząsteczek kwasu nukleinowego, takich jak DNA, w zależności od ich wielkości, i służy do analizy produktów generowanych przez eksperyment, takich jak reakcja łańcuchowa polimerazy. Jest rutynowo stosowany, ponieważ jest tani w prowadzeniu, szybki proces i umożliwia odzysk analizowanego kwasu nukleinowego.
Robienie żelu
Zbierz wszystkie niezbędne przedmioty i wyczyść je 70% etanolem. Elementy obejmują tacę żelową, taśmę samoprzylepną, agarozę laboratoryjną, kolby lub cylindry, 10-krotny bufor do pomiaru stężenia (Tris-Borate-EDTA, TBE), bromek etydyny, barwnik i próbkę do analizy. Upewnij się także, że masz żelowy zbiornik do elektroforezy i źródło zasilania. Agarozę przygotowuje się przez zważenie odpowiedniej ilości taśmy DNA do analizy, zmieszanie jej z buforem TBE i stopienie w kuchence mikrofalowej. Ogólnie, 1% do 2% roztwór jest wystarczający do pokrycia wielu nici DNA badanych w codziennej biologii molekularnej. Małe DNA wymagają bardziej skoncentrowanych żeli, podczas gdy większe wymagają bardziej rozcieńczonych żeli. Roztwór agarozy miesza się z bromkiem etydyny, który wiąże się z kwasem nukleinowym podczas procedury elektroforezy. Ten roztwór wlewa się do tacy stopionej żelu, tak jak wkłada się grzebień formujący, i mieszaninę pozostawia się do zestalenia.
Włóż i aktywuj żel
Żel usuwa się z tacy i zanurza w zbiorniku elektroforezy żelowej zawierającym bufor roboczy. Próbki do analizy miesza się z barwnikami i umieszcza w studzienkach w żelu utworzonym przez grzebień. Dołączono również marker lub skalę, aby umożliwić badaczowi obserwację postępu elektroforezy i określenie wielkości generowanych fragmentów. Prąd elektryczny jest następnie doprowadzany do żelu, co zmusza próbkę do migracji z jednego końca żelu do drugiego. Podczas tego procesu kwasy nukleinowe w próbce rozdzielają się na fragmenty o różnych rozmiarach, przy czym większe cząsteczki zbliżają się do studzienki, a mniejsze cząsteczki przesuwają się na drugi koniec żelu.
Przeanalizuj żel
Po zakończeniu procedury elektroforezy żel usuwa się ze zbiornika i umieszcza w transiluminatorze UV, który oświetla fragmenty kwasu nukleinowego, które wiążą się z fluorescencyjnym bromkiem etydyny. Fotografuje się to i pasma kwasów nukleinowych można mierzyć w zależności od odległości, która migrowała przez żel. Skala rozdzieli je na pasma o znanych rozmiarach i może posłużyć do prowadzenia badacza podczas analizy.